人BMP2-IRES-HIF1αmu腺病毒表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

• 作者: 刘丹平 吴秀成 李全营 李谌 王巍 郭威
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白类 低氧诱导因子 基因工程 重组腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（41）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 19-21
• 分类号: R346
• 字数: 1888字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.41.008

摘要

目的 构建人BMP2-IRES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,并转染HEK293细胞,为下一步转染骨髓基质细胞和体内实验打下基础.方法 PCR扩增HIF1αmu片段,用BstXⅠ和XbaⅠ双酶切回收目的片段.pIRES2-EGFP用BstXⅠ和Xba Ⅰ进行双酶切后回收大片段.将上述回收的目的基因与载体片段连接,然后转化感受态大肠杆菌DH5α扩增；PCR扩增BMP2片段,用Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后回收目的片段.把目的基因与载体片段连接,转化感受态大肠杆菌DH5α扩增重组腺病毒表达载体,通过酶切分析、PCR和测序进行鉴定.将构建好的质粒转染HEK293细胞,检测病毒液滴度.结果 构建了人BMP2-1RES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,转染HEK293细胞见绿色荧光表达.结论 成功构建了人BMP2 -IRES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,酶切分析及DNA测序证实质粒构建正确,质粒成功转染HEK293细胞,并见绿色荧光蛋白表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘丹平		61	259	9.0	13.0
2	李谌		22	51	4.0	6.0
3	王巍		28	254	8.0	15.0
4	李全营		3	9	1.0	3.0
5	郭威		4	9	1.0	3.0
6	吴秀成		2	9	1.0	2.0