Smoothened shRNA载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响

• 作者: 张晴晴 李连宏 毛俊 陶雅军
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: Smoothened shRNA 载体构建 增殖 cyclinD1
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-16
• 分类号: R737.9
• 字数: 2995字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.08.007

摘要

目的 构建并筛选Smoothened(SMO)基因的RNAi表达质粒,了解Hedgehog信号通路影响乳腺癌细胞增殖的作用机制.方法 以脂质体LipofectaminemTM 2000介导转染乳腺癌MCF-7细胞.转染后48 h,采用实时定量RT-PCR技术检测转染细胞中SMO基因mRNA的转录水平,筛选有效的SMO RNAi质粒,Western blot检测SMO蛋白在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,CCK-8法比较转染前后乳腺癌细胞增殖变化,实时定量RT-PCR检测SMO短发夹状RNA(shRNA)对cyclinD1 mRNA表达的影响.结果 4个SMO shRNA表达载体SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3和SMO shRNA-4经测序鉴定证明插入正确.转染48 h后,与MOCK组相比,SMO shRNA-1、SMOshRNA-3、SMO shRNA-4组SMO mRNA表达量均下降(P=0.015、0.002、0.000),其中转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞中SMO mRNA表达水平低于SM0 shRNA-1、SMO shRNA-2、sMO shRNA-3组(P=0.007、0.000、0.046).SMOshRNA-4干扰抑制效率为87%.Western blot可检测到SMO在MCF-7中的表达,干扰片段SMO shRNA-4的抑制效果较好.转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),转染SMO shRNA后cyclinD1 mRNA表达下降(P=0.000).结论 已成功构建并筛选出SMO基因的RNAi表达质粒,SMO shRNA对乳腺癌细胞增殖有明显的抑制作用,Hedgehog信号通路可通过活化cyclinD1诱导细胞恶性增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李连宏		140	1115	15.0	27.0
2	陶雅军		4	22	2.0	4.0
3	毛俊		12	55	4.0	7.0
4	张晴晴		9	29	4.0	5.0