人胆固醇酯水解酶重组腺病毒载体的构建

• 作者: 关宁 冯旭 张兴海 罗俊生 霍晓川 顾立学
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 胆固醇酯水解酶 腺病毒 质粒 人胚肾细胞 腺病毒载体系统
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-18
• 分类号: R651.1
• 字数: 1816字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.10.010

摘要

目的 构建人胆固醇酯水解酶(hCEH)基因重组腺病毒载体,并在人胚肾细胞(HEK293)中扩增.方法 将hCEH基因整合入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hCEH,线性化后与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组质粒pAd-hCEH,酶切后用脂质体转染HEK293,包装成重组体腺病毒Ad-hCEH,经扩增和纯化得到高滴度重组病毒.采用PCR法进行鉴定,绿色荧光蛋白(GFP)追踪,荧光显微镜下观察并计算Ad-hCEH病毒滴度.结果 重组穿梭质粒及其载体经鉴定后,电泳结果与预期相符.Ad-hCEH-EGFP感染HEK293后,随时间增加,HEK293表达绿色荧光的量也增加.hCEH碱基序列经测序与Genebank中已知序列完全吻合.Ad-hCEH电泳结果显示1 700 bp附近有一条带,与目的片段相符合.最终测得Ad-hCEH滴度为1.2×1010 pfu/ml.结论 成功构建了携带hCEH基因的重组腺病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗俊生		60	200	7.0	9.0
2	冯旭		12	36	4.0	5.0
3	关宁		54	204	8.0	10.0
4	霍晓川		41	127	6.0	8.0
5	顾立学		29	326	10.0	17.0
6	张兴海		2	5	2.0	2.0