基于链替代扩增-纳米金比色直观检测单链核酸方法的研究

• 作者: 孙浩然 张玉静 朱乾琨 汤丹 焦虎平
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 修饰纳米金 链替代扩增 核酸检测 比色方法
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 681-683,727
• 分类号: S124
• 字数: 3462字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2011.02.022

摘要

[目的]将链替代扩增技术与核酸修饰纳米金积聚变色的光学特性相结合,设计了一种新型的直观检测3′端暴露单链核酸的方法,实现对单链核酸的高灵敏度检测.[方法]设计一条含有硫代修饰酶切位点的单链核酸(ZDNA),其酶切位点5′端是能将核酸修饰纳米金变色的Linker序列,3′端是能与Target单链核酸3′端完全互补的H序列.当无Target存在时,Linker会充分暴露,能使核酸修饰纳米金积聚呈现紫色;但是当Target存在时,会与H序列完全互补,作为ZDNA的引物进入链替代扩增循环,形成的新链不断与Linker序列互补,不能使核酸修饰纳米金积聚呈现红色,从而间接检测了Target单链核酸.[结果]通过一系列试验确定检测体系,具体为:40 μl修饰纳米金溶液(0.52 nmol/L)加入10 μl酶循环体系(ZDNA 20 nmol/L,33 mmol/L Tris-HCl(pH值7.9);10 mmol/L MgCl2;66 mmol/L NaCl;0.5 mmol/L dNTP;0.1 mg/ml BSA;0.05 U/μl klenow;1 U/μl Hinc II),直观或紫外检测并绘制Target浓度与纳米金积聚程度的标准曲线, 表明Target浓度在1～200 pmol/L的范围内呈现良好的线性关系,R2=0.946,最低检测限是1 pmol/L.[结论]链替代扩增-纳米金比色检测单链核酸方法简便、直观、成本低,与传统修饰纳米金比色检测DNA方法相比,灵敏度提高了104倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玉静	吉林大学畜牧兽医学院	49	120	6.0	7.0
2	汤丹	吉林大学畜牧兽医学院	5	20	3.0	4.0
3	孙浩然	吉林大学畜牧兽医学院	14	61	4.0	7.0
4	焦虎平	吉林大学畜牧兽医学院	3	7	2.0	2.0
5	朱乾琨	吉林大学畜牧兽医学院	3	8	2.0	2.0