具有绿色荧光标记的表达T7RNA聚合酶稳定细胞系的建立

• 作者: 仲跻峰 何洪彬 宋玲玲 李欣 王洪梅 王立群 高远东
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 绿色荧光标记 T7 RNAP 真核表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 2550-2551,2553
• 分类号: S188
• 字数: 2476字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2011.05.012

摘要

[目的]建立具有绿色荧光标记表达17 RNA聚合酶的稳定细胞系.[方法]从BL21(DE3)大肠杆菌中克隆出17 RNAP基因,定向克隆质粒FG12后,构建了表达T7 RNA聚合酶基因(T7)的Lenti-virus重组质粒FG12-T7 RNAP.用此重组质粒转染293T细胞,WB可检测出瞬时表达的T7 RNAP蛋白;利用辅助质粒对表达,T7的非复制型Lenti-virus病毒进行体外包装,所获得的非复制型Lenti-virus病毒感染BHK-21细胞,利用GFP通过流式细胞分选仪筛选表达T7的细胞系,并利用WB检测基因的表达.[结果]通过WB检测出不同代次的阳性细胞中均能稳定表达目的基因T7 RNA聚合酶.[结论]T7 RNA聚合酶能顺利在真核细胞内表达,并在此基础上建立的稳定细胞系为RNA病毒体内拯救技术平台的建立奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王洪梅	山东省农业科学院奶牛研究中心	101	626	12.0	18.0
2	仲跻峰	山东省农业科学院奶牛研究中心	137	888	15.0	20.0
3	宋玲玲	山东省农业科学院奶牛研究中心	20	104	6.0	10.0
4	李欣	山东省农业科学院奶牛研究中心	12	27	4.0	4.0
8	王立群	东北农业大学生命科学学院	68	649	14.0	22.0
9	何洪彬	山东省农业科学院奶牛研究中心	59	320	10.0	13.0
10	高远东	山东省农业科学院奶牛研究中心	1	0	0.0	0.0