哈萨克族食管癌中人乳头状瘤病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用*

• 作者: 刘涛 刘清 朱慧 李秀凌 梁萌 郑树涛 郭景霞 马正海
• 来源期刊: 疾病预防控制通报
• 学科: 医学
• 关键词: 哈萨克族食管癌 HPV16/18 实时荧光定量PCR 病毒载量
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R735.1
• 语种: 中文

摘要

　　目的建立检测哈萨克族食管癌石蜡样本中HPV16/18（human papillomavirus 16/18，HPV16/18）病毒载量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR（real time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR）方法，并探讨病毒载量与食管癌病理分级的相关性。方法分别构建HPV16/18和内参基因β-actin的重组质粒，制备质粒标准品；确定最佳实验条件，建立高灵敏度的qRT-PCR方法，并对103例经病理学确诊的哈萨克族食管癌石蜡包埋组织提取DNA后，进行HPV16/18载量的检测，分析其载量与哈萨克族食管癌病理分级的相关性。结果建立了HPV16/18和β-actin标准曲线，HPV16/18和β-actin标准品Ct值与其相应梯度稀释标准品浓度呈良好线性关系，r 2>0.990，扩增效率分别为85.3%～105.0%，经溶解曲线分析产物特异。103例哈萨克族食管癌样中HPV16的检出率为18.3%，并有3例合并混合HPV18感染；其中HPV16的病毒载量在哈萨克族食管癌转移组中是未转移组中的1.35倍。结论成功建立了灵敏度较高的检测HPV16/18病毒载量的实时荧光定量PCR方法。HPV16/18感染是哈萨克族食管癌发生发展的因素之一，但其病毒载量与恶性程度相关性不显著。