基于荧光素酶报告基因HeLa细胞雌激素检测方法的建立及其在水产品检测中的应用

• 作者: 卢安根 杜寒春 莫建光 阮志华 黄志标 黎颖
• 来源期刊: 分析测试学报
• 学科: 化学
• 关键词: HeLa细胞 雌激素 报告基因 荧光素酶 水产品
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1455-1459
• 页数: 5页
• 分类号: O657.3|Q57
• 字数: 3534字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-4957.2012.11.021

摘要

利用荧光素酶(Luciferase)报告基因检测技术,构建稳定表达人雌激素受体α(hERα)或人雌激素受体β(hERβ)的重组HeLa细胞株(该细胞株无内源性激素受体).通过培养已转入并能成功表达的包含雌激素反应元件ERE的报告质粒pERE-Luc的HeLa细胞,用17β-雌二醇(E2)、己烯雌酚、孕酮处理后检测荧光素酶的表达活性.Luc的荧光表达倍率与E2、己烯雌酚、孕酮标样浓度呈非线性关系,相关系数分别达到0.8798、0.9550和0.9262.1.0×10-13 mol/L时E2可出现明显的兴奋效应,至1.0 × 10-9 mol/L可达到最大反应值,而未转染雌激素受体质粒与E2无明显反应.同时己烯雌酚和孕酮均可以表现雌激素样活性,浓度大于1.0×10-10 mol/L,己烯雌酚表现雌激素样活性；浓度大于1.0×10-11 mol/L,孕酮表现雌激素样活性,表明孕酮的雌激素样活性高于己烯雌酚.使用浓度均为1.0×10-10 mol/L的E2、己烯雌酚、孕酮分别处理,报告基因的发光均值分别为0.9474、0.3123和0.5796,相对标准偏差(RSD)分别为13.7％、3.7％和3.4％,证明上述3种物质对于荧光素酶报告基因表达活性的影响具有很好的重复性.运用同样原理检测草鱼、带鱼、鲫鱼和鲷鱼鱼肉中雌激素样物质的含量,E2的加标回收率均在75％以上,RSD为7.3％ ～11.6％,精密度较好.该研究基于荧光素酶报告基因的体外雌激素样物质检测方法有效可靠.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	莫建光		70	547	12.0	19.0
2	卢安根		20	110	6.0	9.0
3	黎颖		7	17	3.0	3.0
4	杜寒春		7	48	4.0	6.0
5	黄志标		3	23	2.0	3.0
6	阮志华		1	4	1.0	1.0