吸烟者肺癌组织T7噬菌体cDNA文库构建

• 作者: 康现江 王瑞 薛雯 钟理
• 来源期刊: 生物医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肺癌 噬菌体展示 CDNA文库 吸烟者
• 年，卷（期）: swyx,（2）
• 页码范围: 15-18
• 页数: 4页
• 分类号: R73

摘要

目的:为筛选吸烟人群中早期肺癌肿瘤标志物,构建吸烟者肺癌组织T7噬菌体展示cDNA文库。方法:用RNeasy Mini Kit提取吸烟者肺癌组织总RNA,分离纯化mRNA,逆转录合成双链cDNA,经末端修饰、定向EcoRI/HindIII接头连接、接头消化,使其两端分别带有EcoRI和HindIII粘性末端。用Mini Column分离cDNA片段,收集300 bp以上的双链cDNA,与T7Select 10-3b载体连接,体外包装后,以BLT5615为受体菌得到吸烟者肺癌组织T7噬菌体展示cDNA文库。结果:经测定,库容为1.35 ×106 pfu,扩增后文库滴度为4.4 ×1010 pfu/ml。PCR鉴定从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑,重组率为97%,重组体中91%的插入片段长度>300 bp。结论:成功构建了吸烟者肺癌组织T7噬菌体cDNA文库,为下一步筛选吸烟人群中早期肺癌肿瘤标志物奠定基础。