家蚕膜蛋白基因(BmTmC27)的序列分析及组织特异性和原核表达

• 作者: 于威 全滟平 张耀洲 李司 聂作明 舒特俊 谢磊 陈剑清
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕膜蛋白基因BmTmC27 序列特征 转录 原核表达 互作蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 51-59
• 分类号: S881.2|Q78
• 字数: 6982字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2012.01.010

摘要

从家蚕蛹cDNA文库中筛选获得一条家蚕膜蛋白基因序列,通过编码氨基酸序列的同源性比对表明其可能是家蚕的未知功能序列,命名为BmTmC27(GenBank登录号:DY231073.1).生物信息学分析结果表明该基因全长833 bp,由558 bp的开放阅读框、102 bp的5'端非翻译区和173 bp的3'端非翻译区组成,编码蛋白由185个氨基酸组成且合有4个跨膜区,预测蛋白分子质量为20.94 kD,等电点为7.38.将该基因片段与BmNPV的polh基因连接后克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核融合表达载体pGEX-4T-1 -polh-BmTmC27,经IPTG诱导、SDS-PAGE分析表明目的蛋白以包涵体形式在E.coli BL21( DE3)中表达.利用多角体蛋白可溶于碱性环境的性质,采用调节pH值的方法纯化融合表达的重组蛋白GST-Polh-BmTmC27,然后经TEV酶消化获得BmTmC27蛋白.荧光定量PCR分析BmTmC27在家蚕5龄幼虫不同组织中的表达存在明显差异,其中在脂肪体、中肠和气管中的转录水平较高.利用GST沉降技术研究了BmTmC27的互作蛋白,与对照组相比,发现了4条特异性互作蛋白条带.研究结果有助于进一步探究BmTmC27的生物学功能,也为膜蛋白的表达和纯化提供了一种新方法.