豇豆胰蛋白酶抑制剂的非融合表达纯化

• 作者: 卓勤 朴建华 杨晓光 胡贻椿
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 工学
• 关键词: 豇豆胰蛋白酶抑制剂 非融合表达 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 374-378,384
• 分类号: Q789|Q55|TS201.6
• 语种: 中文

摘要

目的 探索一种能获得具豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)活性、免疫原性且氨基酸序列与天然蛋白一致的CpTI蛋白表达纯化方法,为评价转CpTI水稻的安全性提供重要材料.方法 将CpTI基因克隆到PET41EK表达载体中,构建该基因的非融合表达载体PET41EK-CpTI,将表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,对诱导表达的时间、温度及IPTG浓度进行优化获得表达产物,对表达产物进行超滤和阴离子交换纯化从而获得纯化蛋白,对获得的纯化蛋白进行免疫原性、活性及N端测序鉴定等,并测定其浓度.结果 在大肠杆菌Rosetta(DE3)、20～25℃、130r/min、0.5mmol/L IPTG、过夜诱导表达条件下,经过30kDa超滤和DAEE FF阴离子交换纯化,可以获得可溶表达量高、具有CpTI免疫原性和活性的纯化蛋白,其纯度达到95％.结论 利用本研究建立的非融合表达方法可以得到在活性、免疫原性、分子量及氨基酸序列等方面与天然CpTI蛋白基本一致的CpTI蛋白,该法简单易行,能够满足大量生产表达的要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朴建华	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室	125	1563	22.0	35.0
2	杨晓光	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室	196	3171	30.0	48.0
3	卓勤	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室	59	467	14.0	20.0
4	胡贻椿	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室	12	47	3.0	6.0