靶向性沉默DNMT1基因对胰腺癌细胞DNA甲基化的影响

• 作者: 吴洪玉 张尤历 张玉琦 徐岷 李兆申 杜奕奇 高军 高道键 高飞 龚燕芳
• 来源期刊: 中华胰腺病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DNA甲基转移酶1 RNA,小分子干扰 胰腺肿瘤 甲基化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 234-237
• 分类号: R730.231
• 字数: 2677字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.04.006

摘要

目的 观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH-1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响.方法 由美国Ambion公司设计合成DNMT1siRNA和阴性对照siRNA,分别用15、30 nmol/L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞,以未转染组细胞作为对照.应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMT1 mRNA和蛋白的表达；用DNMT活性检测试剂盒检测其活性；用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态；实时PCR法检测hMLH-1 mRNA的表达.结果 转染48 h后,DNMT1 siRNA15、30 nmol/L组细胞DNMT1 mRNA表达量分别为0.573±0.026和0.143±0.044,显著低于对照组的1.020±0.217及阴性siRNA 15、30 nmol/L组的0.900±0.475和0.938±0.327(P值均＜0.05)；DNMT1 siRNA组的DNMT1蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组.DNMT1 siRNA15、30 nmol/L组细胞DNMT活性分别为0.364±0.124和0.250±0.072,明显低于对照组的0.931±0.065及阴性siRNA 15、30 nmol/L组的0.665±0.055和0.472±0.040.DNMT活性与DNMT1 mRNA表达呈正相关(r=0.69,P＜0.01).DNMT1 RNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化.结论 DNMT1 siRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMT1基因的表达,明显抑制DNMT的活性,并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兆申	第二军医大学长海医院消化科	1030	7581	34.0	55.0
2	杜奕奇	第二军医大学长海医院消化科	67	657	14.0	23.0
3	龚燕芳	第二军医大学长海医院消化科	120	602	12.0	17.0
4	张尤历	江苏大学附属医院消化科	122	578	12.0	17.0
5	吴洪玉	第二军医大学长海医院消化科	26	35	3.0	3.0
6	高军	第二军医大学长海医院消化科	91	287	9.0	10.0
7	徐岷	江苏大学附属医院消化科	93	298	9.0	11.0
8	高飞	沈阳军区总医院内窥镜科	30	160	5.0	12.0
9	高道键	第二军医大学长海医院消化科	29	185	8.0	12.0
10	张玉琦	第二军医大学长海医院消化科	4	9	2.0	2.0