表达乙型肝炎病毒抗原的种植性肝脏肿瘤动物模型的建立

• 作者: 任书荣 吴志远 张昆 曲春枫 汪颖 魏勇
• 来源期刊: 中华肿瘤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝脏肿瘤 肿瘤种植 模型,动物 肝炎,乙型
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 486-491
• 分类号: R73
• 字数: 4015字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2012.07.003

摘要

目的 构建持续稳定表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原的肿瘤细胞,建立持续表达HBV抗原的种植性肝脏肿瘤动物模型.方法 以含有2倍体HBV的逆转录病毒载体质粒转染黑色素瘤细胞系B16,获得稳定表达HBV表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)的B16细胞(B16/HBV),分别按每只小鼠100、1000和5000个细胞接种到具有相同遗传背景的C57BL/6J小鼠肝脏被膜下,每组5只小鼠.注射后每周采血,进行血清HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗HBs)检测.采用小鼠腹部超声观测其成瘤情况,计算存活时间.对死亡小鼠肝脏进行病理分析,并检测肿瘤组织中HBsAg和HBcAg的表达.结果 转染HBV病毒的肿瘤细胞B16/HBV传代20次以上后,细胞上清中有持续稳定的分泌型HBsAg表达,2×104个细胞在24h内的HBsAg表达量可达到110 ng,并随时间延长而逐渐累积.未能检测到细胞上清中有HBeAg的表达.免疫组化结果显示,转染细胞中存在稳定的HBcAg表达,主要分布在细胞核中.每只小鼠注射100个B16/HBV细胞,小鼠肝脏成瘤率为80.0％；注射1000和5000个B16/HBV细胞,成瘤率为100％.注射后第4周,注射1000个B16/HBV细胞小鼠的腹部超声检测结果提示,肝脏内有异常回声,不均质回声面积为62.18 mm2.剖腹检查显示,在肝脏中所形成的肿瘤大体呈圆形,血运丰富,瘤组织质软,并有多个转移灶.在成瘤小鼠血清中,可检测到持续表达的HBsAg和抗HBs；所形成的肿瘤组织细胞中有均匀一致的HBsAg和HBcAg表达.结论 HBV逆转录病毒载体质粒转染的B16/HBV细胞可稳定表达HBsAg和HBcAg.通过在肝脏被膜下注射B16/HBV细胞,建立了能持续分泌表达HBV抗原的种植性肝脏肿瘤小鼠模型.