大肠杆菌乙酰羟基酸合酶Ⅰ调控亚基IlvN的结晶及其与配体缬氨酸的共结晶

• 作者: 刘祥 周延菲 席真 牛旭晖 苏晓东
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 乙酰羟基酸合酶 ACT结构域 结晶
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: Q71
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1206.2011.00193

摘要

乙酰羟基酸合酶(acetohydroxyacid synthase,AHAS)是生物体内支链氨基酸合成通路中的第一个通用酶,它是目前市售多种除草剂的靶标.AHAS通常由分子质量较大的催化亚基和分子质量较小的调控亚基组成.催化亚基结合催化必需的辅基(FAD、ThDP和Mg2+)调控亚基可以结合终产物(缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸)作为负反馈信号调节全酶的活性.大肠杆菌中AHAS有3个同工酶,每种同工酶都由催化亚基和调控亚基组成.大肠杆菌ilvN基因编码了AHAS同工酶Ⅰ的调控亚基.ilvN基因克隆到pET28a表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中得到可溶性的大量表达.表达的蛋白质通过镍离子亲和层析和分子筛层析得到纯化.为了对调控亚基的调节机理有深入了解,对IlvN蛋白进行结晶并对蛋白质与其配体缬氨酸进行共结晶.IlvN蛋白晶体衍射能力为2.6(A),IlvN与缬氨酸共结晶的晶体衍射能力为3.0(A).