日本七鳃鳗(Lampetra japonica)VLRB 的克隆表达及单克隆抗体制备

• 作者: 吴芬芳 李庆伟 苏鹏 陈立勇 马宁
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 生物学
• 关键词: 七鳃鳗 可变淋巴细胞受体(VLR) VLRB 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 465-471
• 分类号: Q78
• 字数: 4788字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1005.2012.00465

摘要

七鳃鳗(Lampetra japonica)和盲鳗(Hyperotreti)作为现存的无颌类脊椎动物的代表,其适应性免疫系统中的受体分子与哺乳动物的抗原受体分子不同,这种独特的受体分子称为可变淋巴细胞受体VLRs(Variable lymphocytereceptors).目前VLRs 分为3 类,分别是VLRA、VLRB、VLRC,而VLRB 由七鳃鳗类B 淋巴细胞产生,是其体液免疫中主要成分,与IgM 结构和功能类似.文章对日本七鳃鳗VLRB 基因保守的C 末端进行克隆、原核表达和重组蛋白纯化后,免疫Balb/c 小鼠,通过细胞融合及间接酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)筛选技术得到针对VLRB 保守区的单克隆抗体细胞株.将杂交瘤细胞接种小鼠腹腔得到大量的单抗腹水,经Protein G 亲和纯化后的单抗进行ELISA 与Western blotting 检测.经ELISA 检测抗体效价为 1:40000.Western blotting 结果显示该单克隆抗体能够特异的检测重组VLRB 蛋白及七鳃鳗血清中分泌型VLRB.流式细胞实验证明该单抗能特异识别七鳃鳗类淋巴细胞表面表达的膜型VLRB.VLRB 单克隆抗体的成功制备和建株,为研究日本七鳃鳗基于VLR 的适应性免疫系统提供了重要的工具.