微小RNA芯片检测高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞微小RNA的差异表达

• 作者: 吕红彬 李青兰 苟文军
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 视网膜血管 内皮细胞 微RNAs 寡核苷酸序列分析
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 604-609
• 分类号: R774.1
• 字数: 3946字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2012.07.008

摘要

目的 筛选高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞( HRCEC)差异表达的微小RNA(miRNA),并预测部分差异表达的miRNA调控的靶基因.方法 实验研究.常规培养HRCEC,取生长良好的第3～4代HRCEC,将细胞分为3组:(1)正常对照组:培养液为DMEM高糖培养液,含25 mmol/L葡萄糖；(2)高糖组:培养液为条件培养液,含90 mmol/L葡萄糖；(3)甘露醇高渗对照组:培养液为条件培养液,含65 mmol/L甘露醇+25 mmol/L葡萄糖.各组细胞在上述条件下培养5d后,用细胞凋亡检测试剂盒对细胞进行凋亡检测；提取细胞的总RNA并进行质量检测；miRNA芯片检测差异表达的miRNA,并用实时荧光定量PCR对部分差异表达的miRNA进行验证,运用生物信息学方法预测它们可能调控的靶基因.结果 在荧光显微镜下观察细胞凋亡结果显示,正常对照组及甘露醇高渗对照组细胞的细胞核被4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色而呈蓝色荧光,但无凋亡荧光信号:高糖组细胞的细胞核也呈蓝色荧光,但有绿色的凋亡荧光信号.总RNA的质量检测结果显示,用分光光度计测量正常对照组细胞吸光度值(A)的比值,A260/A280=1.99、A260/A230=2.05；高糖组细胞A260/A280=1.98、A260/A230=2.26.甲醛变性琼脂糖凝胶电泳见电泳条带清晰完整,表明获得的总RNA质量较好且纯度高.rmiRNA芯片检测结果显示,与正常对照组相比,在高糖组一共筛选出49个差异表达的miRNAs(上调＞2倍或下调＜0.5倍),其中表达上调的miRNAs 31个,表达下调的miRNAs 18个.对miRNA芯片检测结果显示在正常对照组和高糖组间表达有差异的has-miR-320c和has-miR-29a*进行实时荧光定量PCR验证,结果与芯片结果一致；对这两个miRNAs进行靶基因预测,结果显示这两个基因涉及很多生长因子和蛋白.结论 部分miRNA在高糖刺激下的HRCEC中存在差异性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕红彬	泸州医学院附属医院眼科	52	423	12.0	18.0
2	苟文军	泸州医学院附属医院眼科	4	13	3.0	3.0
3	李青兰	泸州医学院附属医院眼科	4	14	3.0	3.0