斑马鱼基因ATF4多克隆抗体的制备

• 作者: 吴秀山 唐雄卓 张义 李发祥 李永青 杨荣 江志钢 赵碧峰 陈婷芳
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: ATF4 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 56-59
• 分类号: Q71
• 字数: 2438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2012.01.012

摘要

ATF4是含有bZIP结构域的ATF/CREB转录因子家族成员,对胚胎的发育以及细胞的增殖、分化有重要的调节作用.制备ATF4的多克隆抗体对于研究其在斑马鱼心脏发育过程中的作用有重要的意义.研究首先通过生物信息学方法,选择ATF4基因中特异性强、具亲水性的一段核苷酸序列(1 017 bp),通过PCR扩增,将片段重组到原核表达载体pET-28a,然后转化人Rosetta菌株中.经测序鉴定正确后,用IPTG诱导表达融合蛋白,以该融合蛋白免疫小鼠,获得ATF4多克隆抗鼠血清.对该多抗血清抗体进行验证,具有很好特异性和较高效价,可以用作Western-blotting、免疫印迹等试验分析.