牛朊蛋白和酵母朊毒体结构域融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

• 作者: 刘全国 史喜菊 李冰玲 李炎鑫 杨汉春 马贵平
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛朊蛋白 酵母Ure2p朊毒体结构域 构象转变 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 105-111
• 分类号: S852.659.7
• 字数: 5880字
• 语种: 中文

摘要

利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pET-PrP中,构建原核表达载体pET-PrP-UPD.阳性质粒转化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下获得高效表达.Westernblot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrP-UPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点.利用纯化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨汉春	中国农业大学动物医学院	277	4554	34.0	54.0
2	马贵平		50	217	7.0	13.0
3	李冰玲		36	136	6.0	10.0
4	史喜菊		37	137	6.0	10.0
5	刘全国		28	118	6.0	10.0
6	李炎鑫	中国农业大学动物医学院	31	116	5.0	10.0