摘要:
背景 胰高血糖素与近视的发生密切相关,在一定浓度范围内可抑制近视的发展,但其确切的作用机制尚不明确. 目的 研究胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞(GSFCs)生长的影响及作用机制.方法 获取出生15d的健康纯种豚鼠的巩膜组织,采用组织块培养法进行GSFCs的培养和传代,采用免疫组织化学法检测培养的细胞中波形蛋白抗体、细胞角蛋白抗体及S-100抗体的表达.用完全随机法将培养的细胞分组,分别在不同组的培养孔中加入5、10、50、100、200 μg/L胰高血糖素培养GSFCs 24 h,不加胰高血糖素培养的为对照组.利用MTT比色法观察各质量浓度胰高血糖素作用后及50 μg/L胰高血糖素作用1、2、3、5、7dGSFCs的生长情况,酶联免疫检测仪测量波长490 nm处各孔细胞的吸光度(A490)值,并用ELISA法检测培养72h不同质量浓度胰高血糖素对GSFCs中基质金属蛋白酶2/组织金属蛋白酶抑制剂2(MMP-2/TIMP-2)表达水平的影响,以酶标仪测定450 nm波长处各孔细胞的A450值. 结果 GSFCs传代培养后密度较低时呈枝状排列,密度较高时呈束状或漩涡状排列,波形蛋白抗体反应阳性.随着胰高血糖素质量浓度的增加,细胞的A490值逐渐升高,差异有统计学意义(F=32.340,P=0.013),胰高血糖素质量浓度>10μg/L时,细胞的A490值较对照组明显升高,差异均有统计学意义(t=5.575、6.627、16.074、12.003,P<0.05).培养孔中加入50 μg/L胰高血糖素后随着培养时间的延长,细胞的A490值升高,差异有统计学意义(F时间 =10.610,P=0.024),且与对照组比较细胞的A490值升高,差异有统计学意义(F分组=9.068,P=0.039).胰高血糖素质量浓度在5~200 μg/L时,随胰高血糖素质量浓度的增加,MMP-2含量逐渐减少,差异有统计学意义(F=153.639,P=0.036),但TIMP-2含量的变化差异无统计学意义(F=24.770,P=3.250).结论 胰高血糖素可促进体外培养的GSFCs的增生,其作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能是下调MMP-2在GSFCs中的表达,MMP-2/TIMP-2失衡所致.