农杆菌介导的Lyz-GFP基因对匍匐翦股颖Penn A-1转化和表达的研究

• 作者: 安惠惠 李坚 白生军 马晖玲 马祥
• 来源期刊: 草业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 匍匐翦股颖 基因转化 溶菌酶Lyz基因 绿色荧光蛋白GFP基因
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 141-148
• 分类号: S543+.903|Q943.2
• 字数: 6969字
• 语种: 中文

摘要

以匍匐翦股颖Penn A-1成熟胚为供试材料,建立了其植株高效再生体系.利用农杆菌介导法将溶菌酶与绿色荧光蛋白Lyz-GFP双元基因转入匍匐翦股颖Penn A-1胚性愈伤组织中,经培养获得抗病转基因植株.并对Lyz-GFP双元基因转化Penn A-1的适宜条件进行了研究.研究结果表明,在2.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA的MS培养基上Penn A-1愈伤组织诱导率最高,可达36％,且质量最好.愈伤组织在MSO+0.5 mg/L NAA上分化率最高,达42.5％；浓度为300mg/L的头孢霉素(Cef)可抑制农杆菌LBA4404的生长；Penn A-1胚性愈伤组织经携有pBI121-Lyz-GFP的农杆菌LBA4404 (OD6oo值0.3～0.5)侵染10～15 min,共培养3d后,转化愈伤组织生长状况良好,转化率达12.5％,且在后期的生长和转化苗的再生中有良好的表现,转化苗再生率为27.5％；转化植株有较强的荧光表达量,并经PCR检测,获得的2株匍匐翦股颖Penn A-1转化植株中均扩增出750 bp的目标基因片断.