小鼠角膜基质细胞的KSFM培养基培养法

• 作者: 卢建民 宋秀君 李小磊 王会芳
• 来源期刊: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基质细胞,角膜 KSFM培养基 细胞增殖 生物学特性 小鼠
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 100-105
• 分类号: R772.2
• 字数: 5432字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2012.02.009

摘要

目的 研究使用KSFM培养基能否获取具有增殖能力且保持生物学特性不变的小鼠角膜基质细胞(CSCs).方法 实验研究.将中央区角膜置于EDTA液(20 mmol/L)内孵育45 min后,用手术显微镊小心剥离角膜上皮层以及内皮层,并将获取的角膜基质置于含300 U/ml Ⅰ型胶原酶的溶液中消化4h.离心后采用DMEM基础培养基、DMEM完全培养基(含10％FBS)以及KSFM培养基重悬细胞常规培养,并以含1U/ml分散酶的EDTA液消化传代细胞.同时,观察细胞并绘制细胞生长曲线；采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞角膜蛋白多糖(keratocan)mRNA和乙醛脱氢酶(ALDH)mRNA表达情况；采用细胞免疫荧光染色以及蛋白质印迹方法检测细胞keratocan蛋白的表达情况.采用独立样本t检验对数据进行统计学分析.结果 通过胶原酶消化的方法可以从每只小鼠的角膜基质获取约1×104个单个细胞.RT-PCR结果显示,原代细胞表达CSCs标记物keratocan和ALDH;免疫荧光染色和蛋白质印迹结果显示:原代细胞表达keratocan蛋白.培养于DMEM基础培养基内的原代CSCs无法增殖.培养于DMEM完全培养基内的CSCs可增殖,但第3代细胞不表达keratocan mRNA 和ALDH mRNA以及keratocan蛋白.培养于KSFM培养基内的CSCs也可增殖,第3代细胞仍表达keratocan mRNA和ALDH mRNA以及keratocan蛋白,且与原代细胞相比,表达强度差异无统计学意义.结论 KSFM培养基不仅能维持小鼠CSCs的生物学特性不变,还能有效促进细胞增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋秀君	河北医科大学第三医院眼外伤科	51	212	8.0	11.0
2	卢建民	大连医科大学附属第一医院眼科	22	62	4.0	6.0
3	王会芳	河北医科大学第三医院眼外伤科	3	3	1.0	1.0
4	李小磊	河北医科大学第三医院眼外伤科	3	3	1.0	1.0