猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M基因重组腺病毒的构建及表达

• 作者: 刘烨 吴健敏 张守峰 张念 张菲 扈荣良 毛燕 陈凤莲 马玲 高博
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 M基因 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 23-27
• 分类号: S852.659.6|Q789
• 字数: 3498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2012.01.005

摘要

为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA-GP5-M,与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,包装出含有GP5和M基因的重组腺病毒rAd5-GP5-M.应用PCR技术、间接免疫荧光、Western blot分析,结果表明,GP5和M基因已经被成功整合到了腺病毒基因组上,且GP5和M蛋白在293AD细胞上均得到了表达；滴度测定表明,该重组腺病毒rAd5v-GP5-M的TCID50为10-6.5/mL；连续传代试验表明该重组腺病毒可在细胞内稳定繁殖,有效地转录并表达GP5和M蛋白,具有较高的遗传稳定性.该研究为PRRSV重组腺病毒疫苗的研制打下了基础.