斜纹夜蛾蜕皮响应基因E75D的克隆、原核表达分析及microRNA作用位点预测

• 作者: 刘海远 姜春来 左洪亮 钟国华 高璐
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 斜纹夜蛾 E75D 克隆 原核表达 microRNA
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 510-519
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

E75是昆虫蜕皮级联反应中的早期转录因子之一.本研究运用RT-PCR和RACE技术,首次获得了斜纹夜蛾Spodoptera litura E75D基因,命名为Sli-E75D(GenBank登录号:JQ266225),其开放阅读框全长1 836 bp,编码611个氨基酸残基,3′非翻译区全长为358 bp,同时获得其5 ′非翻译区共341 bp.经核苷酸序列比对分析,E75在鳞翅目昆虫间保守性较高,尤其3′非翻译区具有高保守性,但由于启动子不同,E75异构体mRNA5′端序列存在差异；经氨基酸序列比对,Sli-E75D与棉贪夜蛾Spodoptera littoralis、烟草天蛾Manducasexto、家蚕Bombyx mori E75D的一致性分别为98.4％,79.3％和76.5％.基于E75 3′非翻译区的高保守性,利用PITA和RNAhybird程序预测了最有可能调控鳞翅目昆虫E75基因的3种miRNAs:miR-14,miR-33和miR-87.构建pET28a-Sli-E75D表达载体,分别转化BL21 (DE3)和Transetta(DE3)菌株,检测大肠杆菌Escherichia coli稀有密码子对E75D原核表达的影响,SDS-PAGE结果显示,转化Transetta( DE3)菌株的pET28a-Sli-E75D可高效表达大小约74.79 kD(含预测的67.19 kD Sli-E775D,7.6 kD T7·Tag和His·Tag)的重组蛋白,与其理论分子质量基本吻合,而转化BL21( DE3)菌株的pET28a-Sli-E75D质粒只见微量重组蛋白表达.由于Transetta( DE3)菌株可补充大肠杆菌6种稀有密码子的tRNA,较BL21( DE3)更适合于E75D的外源表达.qPCR检测了斜纹夜蛾从末龄幼虫到成虫发育过程中各时间点Sli-E75的相对表达水平:Sli-E75在6龄幼虫期的表达量较低,从预蛹开始,表达量急剧升高,并在蛹中期达到最高峰,之后迅速下降,但成虫期表达水平又出现回升.这些结果有助于深入研究E75在昆虫蜕皮级联反应中的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟国华	华南农业大学昆虫毒理研究室	109	1742	22.0	36.0
2	刘海远	华南农业大学昆虫毒理研究室	5	15	2.0	3.0
3	左洪亮	华南农业大学昆虫毒理研究室	7	36	4.0	5.0
4	高璐	华南农业大学昆虫毒理研究室	6	29	3.0	5.0
5	姜春来	华南农业大学昆虫毒理研究室	7	45	5.0	6.0