枯草芽孢杆菌guaB基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘永杰 华洵璐 孙梅 庞茂达 张一平 薛玉玲 郑惠华
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 枯草芽孢杆菌 guaB 克隆 表达 载体
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 204-208
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文

摘要

克隆枯草芽孢杆菌guaB基因,构建穿梭表达载体,使其在大肠杆菌中获得表达,为构建鸟苷高产工程菌奠定基础.从枯草芽孢杆菌JSIM-G-518基因组扩增出guaB基因,将其连接到pMD19-T上,得到重组质粒pMD-guaB,进行测序和Blast比对分析.该重组质粒经PstI、BamHI双酶切,获得guaB片段连接至pHP13载体上,构建穿梭表达载体pHP13-guaB,并采用双酶切电泳进行鉴定.将该载体转化人大肠杆菌BL21中,通过SDSPAGE电泳检测guaB基因的表达效果.克隆的guaB基因长度为1510 bp,与GenBank登录的枯草芽孢杆菌同源性为99％,编码500个氨基酸,确认为控制IMP脱氢酶的基因.穿梭载体pHP13-guaB经双酶切后产生1510 bp和4.9 kb两个期望的目的条带.SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量的大小为52.9 k,与预期的IMP脱氢酶分子量一致,且该目的蛋白的表达效果比对照组更明显.论文成功实现了枯草芽孢杆菌guaB基因在大肠杆菌中的表达.