microRNA-22真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系SKOV-3中的稳定表达

• 作者: 奚涛 张蕊 汤锋 邓琳 邢莹莹
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: microRNA-22 肿瘤转移 真核表达质粒 人卵巢癌细胞系SKOV-3
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 209-212
• 页数: 4页
• 分类号: Q7
• 语种: 中文

摘要

为了解决microRNA模拟物半衰期较短,无法达到长时间研究的问题,实验构建了miR-22真核表达质粒并转染人卵巢癌细胞系SKOV-3,建立稳定表达miR-22的细胞模型,为研究miR-22在肿瘤发生发展过程中的作用提供有效的工具.首先设计并构建过表达miR-22的Psilencer4.1-miR-22重组质粒,经宿主菌扩增、酶切、测序鉴定后,重组质粒和阴性对照质粒分别转染卵巢癌细胞系SKOV-3,G418筛选建立稳定表达miR-22(实验组)和control-RNA(阴性对照组)的SKOV-3细胞系,用qRT-PCR验证所构建的细胞系中miR-22表达量的差异.最后通过细胞划痕-修复实验和侵袭小室实验观察过表达miR-22对卵巢癌细胞迁移能力的影响.经宿主菌扩增、酶切、测序证实,成功构建miR-22真核表达质粒,插入的DNA片段与设计序列完全一致.与对照组相比,在建立的稳定表达miR-22的SKOV-3细胞中,miR-22 mRNA水平明显上调(P＜0.05),细胞的迁移能力也显著下降(P＜0.05).综上所述,成功构建了过表达Pre-miR-22的重组质粒,并获得了稳定表达miR-22的SKOV-3细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邢莹莹		39	210	9.0	14.0
2	奚涛		138	927	15.0	25.0
3	邓琳		3	5	1.0	2.0
4	张蕊		3	4	1.0	2.0
5	汤锋		6	7	1.0	2.0