肿瘤睾丸抗原CT45-5基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效果鉴定

• 作者: 于芳 林宇翔 柯波 绳纪坡 罗维 胡宝成 马祖兴
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 肿瘤睾丸抗原CT45家族5号成员基因 小干扰RNA 脆性组氨酸三联体 表达载体
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 180-182
• 分类号: Q78
• 字数: 2535字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.02.007

摘要

目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果.方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5基因的siRNA进行预测,从中筛选出2对合理的CT45-5-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 Hygro中,转化大肠杆菌DHSα,挑取阳性克隆进行测序鉴定；将构建的CT45-5-siRNA重组载体转染人宫颈癌细胞HeLa及HeLa/Fhit细胞,Western印迹检测siRNA对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5及外源Fhit基因表达的干扰效果.结果:构建了2个CT4 5-5-siRNA重组质粒,其中一条对CT45-5基因具有明显的干扰作用,并且Fhit基因表达也被抑制.结论:构建的CT45-5-siRNA为与CT45 -5功能相关的基因研究奠定了基础.