通用真菌引物和探针检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法

• 作者: 崔希增 康军仁 徐云飞 马恩陵
• 来源期刊: 中华临床营养杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠外营养 实时定量PCR 通用真菌引物和探针 肠黏膜屏障 外科感染
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 229-233
• 页数: 5页
• 分类号: R631|Q503
• 字数: 5395字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-635X.2012.04.007

摘要

目的 建立实时定量PCR(RQ-PCR)以真菌通用引物和探针快速准确检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法,并与细菌相鉴别及进行初步临床应用.方法 选择临床常见的真菌基因组多拷贝基因5.8S rDNA作为靶基因设计特异性通用真菌引物和TaqMan探针,采用QIAamp(R)血液DNA小提试剂盒提取多种致病真菌基因组DNA,建立20μl RQ-PCR反应体系,对含有不同载量致病真菌的模拟人全血标本和71份外科发热患者全血标本进行侵袭性真菌基因组的定量检测.结果 本方法的特异性良好,检测限为101拷贝/μl上机待测液(即约105拷贝/ml全血);检测灵敏度和特异度分别为95.5％和97.6％,阳性预告值和阴性预告值分别为98.7％和92.0％;标准曲线R2在0.9931～ 0.9977;批内及批间平均变异系数分别为(10.4±4.0)％和(27.9±2.0)％;人血标本中真菌基因组DNA平均回收率为(91.0±7.6)％,相对回收率平均变异系数为(14.9±4.0)％.71份外科发热患者血标本中未检测出侵袭性真菌基因组.结论 RQ-PCR可以借通用真菌引物和TaqMan探针快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中侵袭性真菌DNA的载量并可与细菌相鉴别,且有着较好的准确度与精密度.外科发热患者血中侵袭性真菌基因组的存在率可能很低.