鹅源新城疫病毒M基因的原核表达及其多克隆抗体制备

• 作者: 刘秀梵 朱杰 段志强 王郁杨 胡增垒 胡娇 胡顺林
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鹅源新城疫病毒 M基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 125-130
• 分类号: Q78
• 字数: 4261字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.01.023

摘要

试验旨在制备原核表达鹅源新城疫病毒(NDV) JS/5/05/Go株M蛋白的多克隆抗体并进行鉴定.以鹅源NDV总RNA为模板,RT-PCR扩增M基因,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET32a-M,转化E.coli BL21 (DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物；用KCl染色切胶纯化法纯化重组蛋白；采用切胶免疫小鼠的方法制备M蛋白多克隆抗体,抗体效价用间接ELISA检测,特异性用Western blot和间接免疫荧光法鉴定.结果表明,在大肠杆菌中成功表达了分子量约为55 000的重组蛋白,用切胶纯化法获得了纯度较高的重组蛋白；ELISA法检测抗体效价可达1∶102 400,Western blot和间接免疫荧光试验结果表明制备的多克隆抗体能够特异性识别纯化的M蛋白及NDV自身表达的M蛋白.