新疆南疆地区奶牛乳房链球菌gapC基因原核表达载体的构建

• 作者: 张辉 焦海宏 陈伟
• 来源期刊: 塔里木大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 乳房链球菌 gapC基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 7-13
• 分类号: S852.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0568.2012.02.002

摘要

为获得乳房链球菌(Streptococcus uberis)gapC基因的原核表达载体,通过PCR方法扩增出新疆南疆地区奶牛乳房链球菌临床分离株的gapC基因,并克隆到原核表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a(+)- gapC,将重组质粒转化宿主菌E.coli BL21进行重组蛋白的表达.实验结果表明,IPTG诱导5～9h均可获得大量重组蛋白.重组蛋白分子量约为54.0 kD,介于43 kD～66.2 kD之间,与预期大小一致,说明表达载体构建成功.通过优化最佳诱导条件,获得乳房链球菌gapC基因重组蛋白的最佳诱导条件为0.5 mmol/L IPTG诱导6h即可获得大量重组蛋白,为进一步确定蛋白的免疫保护性和制备疫苗奠定了基础.