应用双分子荧光互补(BiFC)方法分析烟草中介体亚基之间的互作

• 作者: 吴为人 张重义 王丰青 童治军 魏荷
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 双分子荧光互补(BiFC) 烟草 中介体亚基 互作
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 38-47
• 分类号: S572
• 字数: 7359字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.01.006

摘要

中介体是一种大分子蛋白复合物,中介体亚基之间的相互作用是中介体复合物在真核生物的转录调控中发挥作用的基础.本研究利用同源搜索,克隆了烟草(Nicotiana tabacum)中介体亚基基因NtMed6、NtMed18和NtMed21,测序结果表明NtMed6、NtMed18和NtMed21与拟南芥(Arab idopsis thaliana)中介体同源基因的序列一致性分别为69.46％、76.91％和77.01％.通过筛选适宜的侵染培养基优化了农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达进行亚细胞定位方法,分析了linker序列对亚细胞定位结果的影响.发现以YEB+100mmol/L AS和AA+100 mmol/L AS为侵染培养基时荧光强度大,并且表达荧光的细胞多；构建融合表达载体时添加5个氨基酸编码序列的linker提高了融合蛋白亚细胞定位结果的可靠性.烟草中介体亚基亚细胞定位表明,NtMed8、NtMed 18、NtMed6和NtMed21定位在细胞核和细胞质内,但主要在细胞核里.为进一步证实NtMed8属于烟草中介体亚基,同时研究NtMed8与其它亚基的相互作用,构建了35S驱动的含有EYFPN-端1-173氨基酸和C-端151-238氨基酸编码序列标签的融合表达载体(pNYE和pCYE).把NtMed8、NtMed18、NtMed6和NtMed21的全长ORF亚克隆到相应的载体上,共转化烟草(Nicotiana benthamiana)叶片,结果表明,NtMed8与NtMed 18存在互作,同时还观察到NtMed8与NtMed6的互作以及NtMed 18与NtMed6的互作.BiFC用于检测蛋白之间的互作是一种快捷有效的方法,能够应用于中介体亚基之间结构联系的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴为人	浙江大学农业与生物技术学院	28	625	12.0	24.0
5	张重义	河南农业大学农学院	79	2038	25.0	42.0
9	王丰青	河南农业大学农学院	5	26	3.0	5.0
11	童治军	浙江大学农业与生物技术学院	6	46	4.0	6.0
14	魏荷	浙江大学农业与生物技术学院	5	18	2.0	4.0