猪IL-10的表达及其免疫原性鉴定

• 作者: 侯红岩 侯继波 李倬 薛刚 郑其升 陈瑾
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪IL-10 表达 抗体制备 疫苗佐剂
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 92-98
• 分类号: S851.3
• 字数: 4973字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.01.017

摘要

为探明原核表达的重组猪IL-10对仔猪的免疫原性,根据GenBank公布的猪IL-10基因序列(登录号:L20001)设计并合成了扩增猪IL-10基因的引物.利用ConA刺激猪外周血淋巴细胞,通过RT-PCR扩增出pmIL-10完整基因及其成熟蛋白基因片段(pmIL-10),分别插入质粒pVAX1和pET32α(+),对猪IL-10基因进行原核与真核表达.利用纯化的重组蛋白免疫仔猪,制备抗血清,利用间接ELISA检测血清效价.将pVAX-pIL-10转染COS-7细胞,利用RT-PCR检测PmIL-10的转录,以间接免疫荧光(IFA)鉴定其与原核表达产物制备抗体之间的反应.结果显示:该试验成功获得了猪IL-10基因,重组菌pET-pmIL- 10/Rosetta经IPTG诱导后,猪IL-10获得表达,目的蛋白表达量以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的39.7％；以白油佐剂重组蛋白免疫仔猪可产生高水平的抗猪IL-10的抗体,经ELISA检测,P/N值可达到8,OD630吸光值可达1.875,该抗体与转染pVAX-pmIL-10的COS-7细胞发生明显的荧光反应,说明原核表达的重组猪IL-10免疫产生的抗体具有生物学活性,为日后利用猪IL-10抗体消除病毒 感染中产生的内源性IL-10研究奠定了基础.