结核分枝杆菌双重实时RT-PCR检测方法的研究

• 作者: 刘胜牙 古莉冰 孙杰 朱玉兰 李微 王佃鹏 董瑞玲
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 fbpB mRNA Rnase P 双重实时RT-PCR
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 756-758
• 分类号: R52
• 语种: 中文

摘要

目的 建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的双重实时RT-PCR反应体系,准确快速鉴定结核分枝杆菌.方法 根据GenBank上已发表的结核分枝杆菌表达85B抗原的fbpB mRNA基因序列,进行对比分析,设计合成fbpB引物和探针,其中探针以CY5为报告基团,BHQ3为淬灭基团.根据WHO文献报道合成人类RNase P基因引物和探针,其中探针以FAM为报告基团,BHQ1为淬灭基团.经条件优化后,建立检测结核分枝杆菌mRNA双重实时RT-PCR方法,在同一体系内同时扩增结核分枝杆菌fbpB基因和人类RNase P基因,通过检测10份肺结核患者痰液和10份健康无症状人群痰液,检验方法的特异性、重复性和检测限性.结果 肺结核患者痰液fbpB和RNase P基因均扩增阳性,健康无症状人群痰液fbpB均无扩展曲线,RNase P均扩增阳性.重复性检测显示fbpB基因重复检测的变异系数在1％以下,fbpB检测CT值与痰涂片抗酸染色分枝杆菌的数量呈良好的相关性.结论 建立了一种快速双重实时RT-PCR方法能同时对结核分枝杆菌fbpB mRNA基因和人类RNase P基因进行检测,在检测fbpBmRNA基因的同时,通过检测RNase P基因监测RNA提取效果和PCR反应扩增效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱玉兰		31	102	7.0	8.0
2	孙杰		5	20	2.0	4.0
3	李微		17	39	4.0	6.0
4	董瑞玲		9	22	4.0	4.0
5	刘胜牙		14	8	1.0	2.0
6	古莉冰		6	1	1.0	1.0
7	王佃鹏		20	51	4.0	5.0