柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3基因在毕赤酵母中的表达及分析

• 作者: 姜连连 孔春林 朱顺海 李婷 李洋 董辉 赵其平 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 钙依赖蛋白激酶3 真核表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 108-112
• 分类号: S852.7|Q78
• 字数: 4606字
• 语种: 中文

摘要

旨在真核表达系统中高效表达柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Eimeria tenella calcium-dependent protein kinase-3,EtCDPK3),获得有活性的天然蛋白,利用毕赤酵母表达系统对该基因进行了表达.将EtCDPK3基因连接到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建重组质粒pPIC9K-EtCDPK3.重组质粒通过电击转化入酵母细胞GS115后,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞.重组酵母细胞在含1％甲醇的BMMY培养基中诱导产生目的蛋白,培养收集1-4d的部分上清.经SDS-PAGE检测,所表达的蛋白相对分子质量约为49 kD.Western blotting表明,该蛋白能与兔抗EtCDPK3血清特异性结合.结果表明,柔嫩艾美耳球虫CDPK3基因在毕赤酵母中成功地进行了表达.