TNF-α基因siRNA真核表达载体的构建及其对A549细胞TNF-α和TGF-β1表达的影响

• 作者: 刘绍霞 张国俊 张立英 赵国强
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子α 转化生长因子-β1 RNA干扰 肺腺癌 A549细胞
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 629-632
• 分类号: R363
• 字数: 2281字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2012.05.012

摘要

目的:构建靶向肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,观察其对人肺腺癌A549细胞中TNF-α和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法:依据GenBank中人TNF-α(NM_000594)序列和siRNA靶序列设计原则,设计并合成一对针对TNF-α的特异性序列(siTNF-α)和一对无关序列(siCon).退火合成DNA双链,再分别重组入pRNAT-U6.1载体,经过PCR和DNA测序鉴定.将构建好的重组载体pRNAT-U6.1-siTNF-α、pRNAT-U6.1-siCon及空载体pRNAT-U6.1用脂质体介导转染A549细胞株,分别采用Real time PCR和Western blot方法检测细胞中TNF-α和TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:PCR和DNA测序鉴定证实载体构建成功;转染pRNAT-U6.1-siTNF-α的A549细胞中TNF-α和TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均低于其他3组(FmRNA=478.663,4.081;F蛋白=123.420,6.312,P均<0.05).结论:成功构建了靶向TNF-α基因的siRNA真核表达载体,该载体能够有效沉默A549细胞中TNF-α的表达,TGF-β1基因表达亦受到抑制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵国强	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	245	807	11.0	16.0
2	张国俊	郑州大学第一附属医院呼吸内科	154	710	14.0	21.0
3	刘绍霞	郑州大学第一附属医院呼吸内科	26	108	7.0	9.0
4	张立英	郑州大学第一附属医院呼吸内科	4	11	2.0	3.0