毛乳头细胞促进组织工程皮肤血管化的实验研究

• 作者: 刘坡 刘旭盛 徐盈斌 祁少海 舒斌 谢举临
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 组织工程皮肤 毛乳头细胞 表皮干细胞 同种异体脱细胞真皮基质 血管化 裸鼠
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 135-140
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨毛乳头细胞对表皮干细胞与同种异体脱细胞真皮基质构建的组织工程皮肤血管化的影响. 方法 取门诊包皮环切术患者皮肤,用于表皮细胞培养；取孕19、20周引产胎儿头部皮肤,用于毛乳头细胞培养；患者及家属均知情同意.以中性蛋白酶联合胰蛋白酶消化、分离表皮细胞,Ⅳ型胶原黏附法分选表皮干细胞；以Ⅰ型胶原酶消化法分离毛乳头,常规成纤维细胞培养液培养.以同种异体脱细胞真皮基质为支架,在真皮基质的真皮乳头侧种植毛乳头细胞,基底膜侧种植表皮干细胞构建实验组组织工程皮肤替代物;对照组组织工程皮肤替代物不种植毛乳头细胞.取6～8周龄BALB/C-nu裸鼠60只,随机分成实验组和对照组(n=30)；实验动物背部制造1 cm×1 cm大小全层皮肤缺损模型,将两组组织工程皮肤替代物移植修复创面,2周后观察移植皮肤成活率.术后2、4周,取移植皮肤替代物标本,行HE及免疫组织化学染色,观察移植皮肤替代物CD31表达水平,并计算两组标本血管密度. 结果 Ⅳ型胶原分选后表皮细胞同时表达角蛋白19、β1整合素,提示为表皮干细胞.由毛乳头培养出的细胞表达α平滑肌肌动蛋白,提示为毛乳头细胞.动物移植术后2周,实验组移植皮肤成活率为93.3％ (28/30),对照组为80.0％ (24/30),比较差异有统计学意义(x2=2.31,P=0.00).HE染色观察示实验组表皮层达12层,表皮细胞体积较大；对照组表皮层达4～6层,表皮细胞体积较小.实验组术后2、4周,血管密度分别为(38.56±2.49)个/mm2和(49.12±2.39)个/mm2,对照组分别为(25.16±3.73)个/mm2和(36.26±3.24)个/mm2,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 毛乳头细胞可促进移植皮肤替代物血管形成,利于表皮层重建,提高组织工程皮肤移植成活率.