红景天苷对大鼠BMSCs向胆碱能神经细胞分化的影响

• 作者: 张全伟 张明 文益民 杨银书 荔志云 葛宝丰 董菊子 赵红斌
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: BMSCs 红景天苷 胆碱能神经细胞 大鼠
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 158-165
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨传统中药红景天苷诱导大鼠BMSCs向胆碱能神经细胞分化的作用及影响,以期为红景天苷应用于干细胞治疗神经系统疾病提供理论依据. 方法 取4～6周龄Wistar大鼠(体重约120 g)2只分离、培养BMSCs,并采用流式细胞仪鉴定.取第2代细胞,根据诱导方法不同将实验分为红景天苷诱导组(A组)、维甲酸诱导组(B组)和空白对照组(C组),A、B组BMSCs分别采用红景天苷(20 μg/mL)和维甲酸(5μmol/mL)诱导培养1、3、6、9d,MTT法检测细胞增殖活力；细胞免疫荧光染色检测神经细胞相关标志分子神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、神经微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)、β-微管蛋白Ⅲ (β-Tubulin Ⅲ)、神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)及NGF的表达；RT-PCR检测NSE、β-Tubulin Ⅲ、GFAP、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)、脑源性神经生长因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF) mRNA的表达；ELISA法测定培养液中BDNF和NGF含量；Western blot检测NGF蛋白表达水平. 结果 流式细胞仪检测显示,CD90和CD106阳性,CD34和CD45阴性,实验细胞为BMSCs.A、B组诱导培养6d和9d,细胞增殖活力较C组明显增强(P＜0.05).RT-PCR检测示,A组诱导培养6d,NSE、BDNF、β-Tubulin Ⅲ、GFAP mRNA表达丰度上调至峰值.B组诱导培养6d,NSE mRNA表达丰度上调至峰值；1d时BDNF mRNA表达丰度上调,6d时达峰值；3d时β-TubulinⅢmRNA表达丰度上调至峰值；1d时GFAP mRNA表达丰度达峰值,与其余各时间点及C组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).各组各时间点均未见GABA mRNA表达.细胞免疫荧光染色示,诱导培养3d,A、B组NSE、MAP2、β-Tubulin Ⅲ和GFAP阳性率与C组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)；A、B组诱导培养3、6、9d,Ach阳性率均高于诱导培养1d时及C组阳性率(P＜0.01);A、B组各时间点NGF阳性率均显著高于C组(P＜ 0.01).ELISA法检测显示,A、B组诱导培养1、3、6、9d时,BDNF、NGF表达水平均较C组上调(P＜0.01),各时间点A、B组间BDNF表达水平比较差异无统计学意义(P＜0.01).Western blot检测显示,A组诱导培养6d、B组诱导培养3d时NGF蛋白表达最高. 结论 红景天苷能定向诱导大鼠BMSCs分化为胆碱能神经细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	葛宝丰		277	2232	25.0	33.0
2	文益民		49	241	10.0	13.0
3	赵红斌		77	325	10.0	13.0
4	荔志云		113	407	10.0	13.0
5	杨银书		81	303	10.0	12.0
6	董菊子		26	164	7.0	12.0
7	张明		7	28	4.0	5.0
8	张全伟		4	18	2.0	4.0