单管多重荧光定量RT-PCR方法鉴别新甲型H1N1及甲型和乙型流行性感冒病毒

• 作者: 何永强 张严峻 张弘 李榛 王真
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录聚合酶链反应 流感病毒A型,H1N1亚型 流感病毒A型 流感病毒B型
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 检验技术
• 页码范围: 273-276
• 分类号: R1
• 字数: 3317字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2012.03.017

摘要

目的 建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒(简称流感)病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法.方法 2010年10月至2011年4月,采集流感样患者咽拭子样本213份.分别选用新甲型H1N1流感病毒HA基因、甲型流感病毒M基因和乙型流感病毒NP基因中的152、128和107 bp片段作为荧光定量PCR检测的靶片段,设计特异性引物和不同发光基团标记的TaqMan探针,采用体外转录构建标准品,绘制标准曲线,评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度,并对213份流感样患者咽拭子样本进行检测及测序验证.结果 3种病毒对应的标准曲线分别为:新甲型H1N1流感病毒:Y=-3.46lgX+ 46.985；甲型流感病毒:Y=-3.49lgX +37.709;乙型流感病毒:Y=-3.51lgX +38.889,y为Ct值,lgX为病毒RNA拷贝数的对数值.质粒标准曲线的方差系数为0.998,灵敏度达到每个反应102拷贝/μl,特异度强.213份样本中检出新甲型H1N1流感病毒核酸39份(18.3％),甲型流感病毒核酸阳性63份(29.6％),乙型流感病毒核酸阳性23份(10.8％),阳性样品经过测序验证.结论 为鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流感病毒建立的单管多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何永强	浙江出入境检验检疫局技术中心	12	95	6.0	9.0
2	张弘	浙江中医药大学附属第一医院医务部	22	120	7.0	10.0
3	王真	浙江中医药大学附属第一医院医务部	57	294	10.0	15.0
4	张严峻	浙江省疾病预防控制中心病毒检测所	64	683	13.0	24.0
5	李榛	浙江省疾病预防控制中心病毒检测所	11	70	6.0	8.0