谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)海藻糖合成酶的定点突变及其酶学性质研究

• 作者: 朱绮霞 杜丽琴 王青艳 罗兆飞 陈发忠 韦宇拓 黄日波
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 海藻糖合成酶 谷氨酸棒杆菌 定点突变 酶学性质
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 页码范围: 169-173
• 分类号: Q55
• 字数: 4645字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9164.2012.02.020

摘要

以已知晶体结构的Pseudomonas mesoacidophila MX-45菌株海藻酮糖合成酶(MutB)的晶体结构为模板,在SWISS-MODEL模建立谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)海藻糖合成酶的立体结构,并对初始结构作能量优化,通过氨基酸序列比对,选择TreS-glu保守区内的氨基酸R245、D247、E289、F244和保守区外的氨基酸A288进行定点突变,并对突变酶F244C、F244L、F244W、F244Y、A288G、R245X、E289X、D247N、D247E进行纯化和酶学性质研究,比较突变子对酶活性和热稳定性的影响.结果表明,R245、E289突变为其它的19个氨基酸后酶活力全部丧失,D247E和D247N也丧失酶活,F244C、F244L、F244W、F244Y和A288G的比活力分别降低到TreS-glu的38％、24％、62％、64％和35％,A288突变成T288后没有酶活.与TreS-glu相比,F244C、F244W、A288G的Km值基本不变,F244L、F244Y对底物麦芽糖的亲和力降低,F244Y的最适反应温度和TreSglu相同,均为27℃,而F244C、F244L、F244W和A288G的最适温度提高到32℃.与TreS-glu相比,突变酶的最适反应pH值均有所下降,其中F244C、F244Y和A288G的为7.5,比TreS-glu的8.0均下降了约0.5个单位,而F244L和F244W的为6.5,比TreS-glu的8.0均下降了近1.5个单位.与TreS-glu相比,突变酶的热稳定性均有不同程度提高,其中F244Y、F244W和A288G的Tm值比TreS-glu的提高约1℃,F244L提高约2℃,F244C提高了近4℃.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜丽琴	广西大学生命科学与技术学院	33	117	7.0	9.0
2	韦宇拓	广西大学生命科学与技术学院	83	584	14.0	20.0
3	王青艳	广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心	19	145	7.0	11.0
4	陈发忠		5	39	4.0	5.0
5	朱绮霞	广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心	7	30	3.0	5.0
6	罗兆飞		4	26	3.0	4.0