一氧化氮对体外培养人表皮干细胞生物学行为的影响

• 作者: 吴军 周俊峄 姚志慧 孙薇 崔艳艳 张小容 杨俊杰 杨思思 王颖 罗高兴 胡晓红 詹日兴 谭江琳
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 一氧化氮 细胞运动 表皮干细胞 创面愈合
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 125-129
• 分类号: R644
• 字数: 4361字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2012.02.012

摘要

目的 观察外源性NO对人表皮干细胞(ESC)脱黏附、增殖以及迁移功能的影响.方法 采用改良Ⅳ型胶原快速黏附法分离、培养人ESC,倒置相差显微镜下观察其形态；蛋白质印迹法和免疫荧光法观察ESC标志物整合素β1和细胞角蛋白19(CK19)的表达.对贴壁生长的ESC行划痕处理,用0(对照)、1、10、100、500 μmol/L NO供体S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)作用细胞12、24 h,检测细胞迁移率；Transwell实验检测SNAP(浓度同上)对ESC趋化能力的影响(计数转膜细胞).采用0、10、100、500 μmol/L SNAP作用细胞lh,黏附实验检测SNAP对ESC黏附功能的影响,计算黏附抑制率；于上述4种浓度SNAP作用0(即刻)、12、24、48 h,采用酶标仪检测ESC增殖水平,数据以吸光度值表示.对数据进行单因素方差分析和Dunnett t检验. 结果 (1)倒置相差显微镜下可见,细胞培养5～9d形成小克隆；培养10～14 d,细胞增殖明显加快.蛋白质印迹法和免疫荧光法检测结果显示,所分离的细胞均能表达CK19和整合素β1.由此鉴定该细胞为ESC.(2)与0 μmol/L SNAP作用12、24 h后细胞迁移率[(35.7±0.3)％、(45.7±5.0)％]比较,1～ 100 μmol/LSNAP均能促进ESC迁移,其中100 μmol/L SNAP作用后细胞迁移率达峰值[(48.8±2.7)％、(82.1±15.8)％,t值分别为8.34、5.10,P值均小于0.01].100 μmol/L SNAP作用后转膜细胞数显著多于0 μmol/L SNAP作用后(t =9.24,P=0.00).100、500 μmol/L SNAP作用后,ESC黏附能力明显低于0 μmol/L SNAP作用后(t值分别为4.30、4.67,P值均为0.00).100、500μmol/L SNAP作用24、48 h,细胞增殖能力明显强于0μmol/L SNAP作用后(t值为2.84 ～8.17,P值均小于0.05). 结论 适宜浓度的外源性NO对体外培养人ESC的迁移功能有促进作用.外源性NO对体外培养人ESC具有脱黏附、促增殖作用.