珍稀濒危植物长序榆的ISSR-PCR引物筛选及反应条件的优化

• 作者: 刘鹏 吴玉环 徐根娣 李文巧 邱志军 高建国
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 长序榆 ISSR-PCR 反应体系 优化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 560-567
• 分类号: Q946-3
• 语种: 中文

摘要

采用正交设计试验,利用引物UBC834对长序榆ISSR-PCR扩增的主要影响因子Buffer(含Mg2+)浓度、模板DNA、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度进行优化分析,并在此基础上对PCR反应过程中的退火温度、循环次数、延伸时间进行检测.结果表明,在25 μL ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度为2.5tLBuffer(含Mg2+),50 ng模板DNA,2.5 UTaq DNA聚合酶,1.2 μmol·L-1引物,0.2mmol·L-1 dNTPs,引物UBC834的最佳退火温度为57℃,最佳循环次数和延伸时间分别为35个循环和1min.此外,还利用优化的反应体系成功筛选出11条ISSR引物,并用筛选的引物对长序榆的遗传多样性进行了分析,结果发现,在物种水平上,长序榆的遗传多样性较高,多态位点百分率(PPB为82.35％,Shannon信息指数(I)为0.395 9,Nei,s基因多样性指数(H)为0.258 5.而种群水平上的遗传多样性则较低,多态位点百分率(PPB)、Shannon信息指数(I)、Nei’s基因多样性指数(H)分别为29.07％、0.173 3和0.1191.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐根娣	浙江师范大学生态研究所	197	3575	31.0	44.0
5	吴玉环	杭州师范大学生命与环境科学学院	46	221	8.0	12.0
6	高建国	浙江师范大学生态研究所	6	32	3.0	5.0
10	邱志军	浙江师范大学生态研究所	7	78	6.0	7.0
14	李文巧	浙江师范大学生态研究所	3	16	2.0	3.0