共表达甲型流感病毒M1和HA抗原的重组杆状病毒的构建

• 作者: 刘晓宇 姚立红 张智清 徐鹏卫 曾宪垠 郭建强 陈爱珺
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒 基质蛋白1 血凝素 共表达 杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 231-236
• 页数: 6页
• 分类号: R373.1
• 语种: 中文

摘要

为构建同时表达流感病毒M1和HA抗原的重组杆状病毒,采用PCR扩增流感病毒A/PR/8/34株的M1基因和去除信号肽的HA基因,将两基因克隆到杆状病毒转座载体pFastBac Dual的两个启动子下游的多克隆位点,筛选出阳性重组转座载体pFastBac Dual-M1-HA.将其转化含有杆状病毒穿梭载体(Bacmid)的DH10Bac感受态细胞,通过抗生素、蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-M1-HA,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-M1-HA.提取重组病毒基因组,通过PCR鉴定外源基因插入成功.间接免疫荧光和Western-blot检测表明,该重组杆状病毒在Sf9昆虫细胞中成功地表达了M1和HA.应用杆状病毒/昆虫细胞系统成功共表达流感病毒M1和HA抗原,为研究流感病毒VLP的形成机制和开发新型流感疫苗奠定了基础.