超大孔离子交换制备色谱分离纯化高活性凝血因子Ⅷ

• 作者: 余蓉 周月芳 康丽梅 张焱 李由 罗坚 苏志国
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 超大孔离子交换制备色谱 凝血因子Ⅷ 血浆蛋白 分离纯化
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 618-623
• 分类号: O658
• 字数: 3382字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2012.01036

摘要

建立了一条从人血浆中分离高活性凝血因子Ⅷ(FⅧ)的纯化工艺.基于FⅧ和介质孔径的尺度比及其对蛋白质活性影响的分析,设计了以超大孔离子交换制备色谱为核心步骤的新型分离纯化工艺.分别进行超大孔离子交换色谱与传统离子交换色谱的条件优化,并对优化工艺所得产品进行了活性检测(底物显色法)和纯度检测(高效凝胶过滤和凝胶电泳).结果表明,超大孔介质结构不但可以有效地保护蛋白质大分子结构,而且能够大幅度地提高制备色谱的传质速率,从而得到具有高凝血活性的FⅧ产品.FⅧ在超大孔制备色谱过程中的回收率(85％)比传统离子交换制备色谱高4～5倍,产品比活高达154 IU/mg.此外,还研究了超大孔介质的再生程序,采用5个柱体积的1mol/L NaOH低流速清洗色谱柱,保证了色谱工艺的稳定性.本纯化工艺步骤简单,重现性好,易于放大生产.