基于Red重组系统构建含Flag标签标记UL23基因的重组人巨细胞病毒

• 作者: 冉艳红 刘明亮 周天鸿 曾宝娟 李婧惠 李弘剑 李继东 肖静 胡嘉淼
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: UL23人巨细胞病毒 Red同源重组 pKD46 pCP20
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 97-101
• 分类号: Q78
• 字数: 3577字
• 语种: 中文

摘要

利用来源于λ噬菌体的Red系统,将Flag标签及两侧带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段插入原HCMV TowneBAC中UL23基因3 '末端区域,通过卡那抗性筛选带有抗性标记的重组菌株,并通过表达重组酶FLP的质粒pCP20去除卡那霉素抗性基因,得到带有Flag标签标记UL23基因和单一FRT位点的突变BAC.重组后的BAC分子同质粒pcDNA3.1(+)-pUL82共转染HFF细胞后重建重组HCMV.Western blotting检测证实所构建重组病毒能够表达含Flag标签标记的pUL23蛋白.此含有Flag标签标记UL23基因的重组HCMV的成功构建为了进一步研究人巨细胞病毒UL23基因及其产物的功能提供依据.