稳定表达野生型p53基因人骨肉瘤细胞株的建立与鉴定

• 作者: 吕智 雷晓晶 韩鹏飞
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: p53 基因转染 骨肉瘤 基因表达
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 188-191
• 分类号: R738
• 字数: 3180字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1007-6611.2012.03.009

摘要

目的 建立稳定表达外源性野生型p53基因的人骨肉瘤细胞株(u-2 OS),为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤自杀基因治疗中的协同作用提供体外实验模型建立与鉴定的方法. 方法 利用分子生物学基因克隆技术将人类野生型p53基因cDNA片段插入到表达载体pIRES-EGFP中,得到重组质粒pIRES-EGFP-p53,并通过PCR、酶切电泳等方法进行质粒鉴定；然后用该重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,转化菌落经PCR扩增后,将提取的质粒DNA用脂质体介导的转染方法导人U-2OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系. 结果 成功地构建出包含有野生型p53 cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-p53,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计；并将该重组质粒成功导人人骨肉瘤细胞株U-2OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系,命名为u-2-p53 OS.转染后的骨肉瘤细胞出现散在的凋亡现象. 结论 利用基因转染技术,建立了稳定表达外源性野生型p53基因的人骨肉瘤U-2-p53 OS 细胞系,为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤自杀基因治疗中的协同作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕智	山西医科大学第二临床医学院骨科	90	257	8.0	10.0
2	韩鹏飞	山西省长治市第二人民医院骨科	5	47	2.0	5.0
3	雷晓晶	山西省长治市第二人民医院骨科	3	10	1.0	3.0