稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体细胞株的筛选与应用

• 作者: 杨霞 王川庆 王新卫 王珊 王艳 赵军 迪丽拜尔·阿木提 陈陆
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 羊布鲁菌 脂多糖抗原 酶联免疫吸附试验 单克隆抗体 杂交瘤细胞
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 290-298
• 分类号: S852.614
• 字数: 7008字
• 语种: 中文

摘要

研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法.本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定.用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BAIB/c雌鼠,第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16M全菌加等量弗氏完全佐剂；第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂.将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法,筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株.筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5H3、6B8和3H7,细胞培养上清的ELISA效价在1:1 000～1:5 000,小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1:10 000～1:160 000；抗体亚类鉴定表明:5H3、6B8属于IgM亚类,3H7属于IgG3亚类；特异性试验结果显示:3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应,仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应.布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示,获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物.利用所建立的单克隆抗体细胞株,建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法,并进行了特异性和敏感性检测.对模拟样品和临床样品进行检测,准确性均很高.