在毕赤酵母中利用口蹄疫病毒(FMDV)2A实现dTomato和串联MagaininⅡ基因的共表达

• 作者: 何宏轩 卢艳敏 崔海信 王承民
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 抗菌肽 MagaininⅡ 口蹄疫病毒(FMDV) 2A 共表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 196-202
• 分类号: S852.65
• 字数: 4200字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.02.012

摘要

抗菌肽(antibacterial peptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽,是天然免疫的重要组成部分.为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况,本研究利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV) 2A将荧光蛋白dTomato基因和3个串联的MagaininⅡ基因融合到一个开放阅读框中(open reading frame,ORE),融合的基因被置于pPIC9K载体醇氧化酶基因(AOX1)启动子的下游,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC9K-dTomato -2A-3M,将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115中,经G418筛选和PCR鉴定得到阳性转化子,然后将其转至摇瓶,在30℃、0.5％甲醇的条件下进行诱导表达,连续诱导3d.SDS-PAGE电泳图谱显示,在31 kD(dTomato)和9.5kD(3M)处有蛋白条带出现,在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光,对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑菌试验结果表明,重组抗菌肽串联的MagaininⅡ具有明显的抑菌效果.结果表明,由2A连接的融合基因(荧光蛋白dTomato和串联的MagaininⅡ)在毕赤酵母中成功的进行了表达,FMDV 2A在其C端剪切多聚蛋白,得到dTomato和串联的MagaininⅡ两个独立而有活性的蛋白,为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢艳敏	中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所	48	196	6.0	13.0
3	崔海信	中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所	49	442	13.0	19.0
4	何宏轩	中国科学院动物研究所动物生态与保护生物学院重点实验室国家野生动物疫病研究中心	59	311	9.0	15.0
5	王承民	中国科学院动物研究所动物生态与保护生物学院重点实验室国家野生动物疫病研究中心	14	55	5.0	6.0