绵羊GM-CSF原核表达及蛋白功能检测

• 作者: 刘志方 张辉 李天森 李蕊 杨霞 王讲德 监通 盛金良 陈创夫 黄林
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 绵羊 GM-CSF 蛋白表达 蛋白纯化 细胞增殖试验
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 20-25
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3610字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2012.05.108

摘要

目的:构建GM-CSF原核表达载体,并诱导表达、纯化其蛋白.方法:将GM-CSF基因克隆至原核表达载体pET-32中,转化至BL21中,用智能蛋白质多维纯化系统(AKTAxpressTM)纯化目的蛋白,利用MTT法测定GM-CSF融合蛋白对绵羊外周血淋巴细胞的增殖活性.结果:成功获得了435bp的绵羊GM-CSF基因片段,诱导表达了35kDa融合蛋白GM-CSF,其纯度达95％以上,浓度达860mg/mL;通过MTT证明该融合蛋白对绵羊淋巴细胞具有增殖活性,其作用最明显的蛋白浓度是200μg/mL.结论:成功获得重组蛋白GM-CSF,该蛋白具有较好的生物活性,为免疫增强佐剂的开发奠定了基础.