禽流感病毒神经氨酸酶基因在重组杆状病毒中的表达

• 作者: 包红梅 孙佳善 孙晓东 文雪霞 熊永忠 王秀荣 赵玉辉 路冰 陈化兰
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 神经氨酸酶 重组杆状病毒
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 16-20
• 分类号: S852.652
• 字数: 3003字
• 语种: 中文

摘要

根据已知H5N1亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)基因序列设计并合成引物.从H5N1亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高保真DNA聚合酶扩增NA基因,构建转移载体pFastBacHTA-NA,并与大肠杆菌DH10Bac的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-NA.在脂质体介导下将rBacmid-NA转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.在sf9昆虫细胞中表达NA蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和激光共聚焦检测蛋白.结果表明:表达的NA蛋白分子量约为53 ku,该蛋白能与H5N1亚型AIV血清发生特异性反应,证明NA蛋白表达正确,具有良好的免疫反应性.