重组人KGF基因减毒沙门氏菌菌株的构建及鉴定

• 作者: 刘春杰 哈小琴 张尚弟 李戈 杨志华 胡永浩
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺损伤 角质细胞生长因子 减毒沙门氏菌
• 年，卷（期）: 2012,（30）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 30-35
• 页数: 6页
• 分类号: R563
• 字数: 4659字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带人角质细胞生长因子(KGF)基因真核表达载体的减毒沙门氏菌,并进行稳定性检测及体外表达鉴定,为探索制备针对高原急性肺损伤的细胞因子保护剂提供理论和实验依据.方法 采用RT-PCR法从正常人皮肤组织总RNA扩增出KGF cDNA全长,测序正确后将其定向插入到pcDNA3.0(+)质粒BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之间;以电转化法将构建成功的质粒转化入减毒沙门氏菌Ty21a中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPK,并将其在卡那霉素(+)和卡那霉素(-)的LB培养板上分别传代培养40代,每隔10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定；TPK菌株转染A549细胞,转染24 h及48 h后以RT-PCR及ELISA法检测KGF基因及蛋白表达水平.结果 成功构建了携带KGF基因的重组减毒沙门氏菌TPK,其可稳定遗传,不因无选择性压力而使质粒丢失,并能在体外稳定表达KGF基因及蛋白.结论 携带KGF基因减毒沙门氏菌TPK的成功构建和体外稳定表达为进一步研究角质细胞因子KGF对肺损伤的保护作用提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡永浩	甘肃农业大学动物医学院	96	391	9.0	16.0
2	李戈	甘肃农业大学动物医学院	1	3	1.0	1.0
3	杨志华	甘肃农业大学动物医学院	1	3	1.0	1.0