家蚕和野桑蚕脂肪酸脱氢酶desat4全长cDNA和启动子的克隆及其原核表达

• 作者: 查幸福 程道军 胡晓明 赵萍 陈全梅 马振刚
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕 野桑蚕 脂肪酸脱氢酶 全长cDNA 启动子 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 885-894
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

[目的]获得家蚕Bombyx mori和野桑蚕Bombyx mandarina脂肪酸脱氢酶基因desat4的cDNA及其启动子序列,并应用原核表达系统获得目的蛋白质,为进一步研究该基因的功能提供基础.[方法]利用RACE技术克隆家蚕和野桑蚕desat4基因全长cDNA序列,基于家蚕全基因组序列设计引物克隆它们的启动子,并采用原核表达技术对该基因进行异源表达.[结果]克隆得到家蚕与野桑蚕desat4基因全长cDNA,长度分别为1 717 bp和1 718bp,ORF长度为1 059 bp,编码352个氨基酸残基,结构上有3个组氨酸保守区和4次跨膜结构域,说明该蛋白质是膜蛋白.同源性分析发现Desat4氨基酸序列与烟草天蛾Manduca sexta MsexKPSE脱氢酶拥有88.9％相似性.克隆获得的家蚕和野桑蚕desat4基因启动子序列长度分别为1 808 bp和870 bp,该区域包含有热休克因子HSF(heat shock factor)结合位点、NIT2结合位点和CdxA(caudal type homeobox transcription factor A)结合位点等等,并未发现有典型的TATA-box,但在靠近5'-UTR区域发现了转录起始因子特征序列.时期表达谱分析显示desat4基因从刚产下卵到成虫(蛾)的36个不同发育时间点都有持续稳定的表达.应用原核表达系统成功地表达了Desat4蛋白质,并用温和变性剂十二烷基-β-D-麦芽吡喃糖苷( dodecyl-β-D-maltoside,DDM)就能很好地促进该蛋白质的溶解.[结论]本研究成功地克隆了家蚕和野桑蚕desat4基因全长cDNA及其启动子序列并进行了序列比对分析,构建了desat4基因的原核表达载体并成功表达,为进一步研究该基因的功能提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	查幸福	西南大学蚕学与系统生物学研究所家蚕基因组生物学国家重点实验室	7	28	3.0	5.0
2	陈全梅	西南大学蚕学与系统生物学研究所家蚕基因组生物学国家重点实验室	5	12	3.0	3.0
3	胡晓明	西南大学蚕学与系统生物学研究所家蚕基因组生物学国家重点实验室	2	6	2.0	2.0
4	马振刚	西南大学蚕学与系统生物学研究所家蚕基因组生物学国家重点实验室	8	26	3.0	4.0
5	程道军	西南大学蚕学与系统生物学研究所家蚕基因组生物学国家重点实验室	9	22	3.0	4.0