RNA干扰沉默编码跨膜蛋白35基因表达对肝癌细胞生长及细胞周期的影响

• 作者: 张壮壮 李坤雨 李牛 王群 邓庆 韩泽广
• 来源期刊: 兰州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 四跨膜蛋白 肝癌 细胞周期
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 17-22,26
• 页数: 7页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4632字
• 语种: 中文

摘要

目的 研究跨膜蛋白35(TMEM35)基因在肝癌细胞生长、细胞周期中的作用,探讨跨膜蛋白TMEM35作为潜在肝癌治疗靶点的可行性.方法 利用跨膜蛋白二级结构预测工具SPLIT对TMEM35蛋白的二级结构进行分析；利用实时定量多聚酶链反应技术检测TMEM35基因在肝癌患者癌组织及相应癌旁组织中的表达情况；采用化学合成干扰小RNA片段(siRNA)干扰TMEM35基因在肝癌细胞MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,通过软琼脂克隆形成实验观察肝癌细胞非贴壁依赖性克隆生长情况,流式细胞术分析细胞周期；通过蛋白功能相互作用网络数据库STRING推测TMEM35蛋白发挥相应功能的搭档基因.结果 TMEM35为具有4个跨膜结构域的四跨膜蛋白,实时定量多聚酶链反应检测发现TMEM35基因在肝癌中表达紊乱,其中与相应癌旁组织相比较,TMEM35在14例癌组织中表达显著上调,在20例癌组织中表达显著下调(P＜0.05).针对TMEM35基因设计合成siRNAs能够特异性沉默TMEM35基因在肝癌细胞株MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,并且肝癌细胞在软琼脂培养条件下,形成的克隆显著减少.流式细胞术分析发现干扰TMEM35基因表达,能够减缓细胞周期进展,表现为细胞G1期增多,S期减少.结论 TMEM35基因编码具有四跨膜结构域的膜蛋白,在肝癌细胞生长中发挥重要作用.